固相(xiāng)萃取(qǔ)工(gōng)作原(yuán)理(lǐ)是利用選擇(zé)性吸附(fù)與選擇(zé)性洗脫的液相色(sè)譜(pǔ)法分(fēn)離原理。較常(cháng)用的(dí)方(fāng)法是使(shǐ)液體樣品(pǐn)溶液(yè)通過(guò)吸附(fù)劑(jì)，保(bǎo)留其中被(bèi)測物質(zhì)，再選用適當強度溶劑(jì)衝去雜質，然後(hòu)用少量(liáng)溶(róng)劑迅速(sù)洗脫(tuō)被(bèi)測物質(zhì)，從而(ér)達到快(kuài)速(sù)分離淨化(huà)與(yǔ)濃縮(suō)的目的。固(gù)相萃取(qǔ)也可以將其近似地看作(zuò)一種(zhǒng)簡單的(dí)色(sè)譜(pǔ)分離(lí)過(guò)程。下麵(miàn)以上海(hǎi)本(běn)昂科學儀(yí)器有限公司(sī)的SPE-12固(gù)相萃(cuì)取儀為例，簡(jiǎn)單介(jiè)紹固相(xiāng)萃取(qǔ)儀的操作(zuò)方(fāng)法及(jí)步(bù)驟。
一(yī)，選(xuǎn)擇(zé)SPE小柱(zhù)或濾膜
首先，根據待測樣(yàng)品(pǐn)的性(xìng)質(zhì)，選擇(zé)對(duì)其有較強保留能力(lì)的固定(dìng)相(xiāng)，若(ruò)待(dài)測樣品帶(dài)負電荷, 可用(yòng)陰離子(zǐ)交(jiāo)換(huàn)填(tián)料, 反之(zhī)則用陽離(lí)子交(jiāo)換填(tián)料(liào)。若為(wéi)中性(xìng)待測(cè)物, 可(kě)用反相填料(liào)萃取。SPE小(xiǎo)柱或(huò)濾(lǜ)膜(mó)的大(dà)小與規格應視(shì)樣品中待測物(wù)的(dí)濃(nóng)度大(dà)小(xiǎo)而(ér)定(dìng)。對於(yú)濃度(dù)較低(dī)的(dí)體(tǐ)內(nèi)樣(yàng)品(pǐn), 一(yī)般(bān)應選(xuǎn)用(yòng)盡量少的(dí)固(gù)定相填料萃取較大(dà)體(tǐ)積的樣(yàng)品。
二，活(huó)化(huà)
萃(cuì)取前先(xiān)用充(chōng)滿(mǎn)小柱的溶劑(jì)衝洗小(xiǎo)柱(zhù)或用5-10ml溶劑衝洗(xǐ)濾(lǜ)膜使(shǐ)SPE填(tián)料保持(chí)濕潤(rùn), 因(yīn)為填料幹燥會(huì)降(jiàng)低(dī)樣(yàng)品(pǐn)保留值，而各(gè)小(xiǎo)柱(zhù)的幹(gān)燥(zào)程度不一(yī),也會(huì)影響(xiǎng)回收率(shuài)的(dí)重現性(xìng)。先用甲(jiǎ)醇等(děng)水(shuǐ)溶(róng)性有(yǒu)機(jī)溶劑(jì)衝洗(xǐ)填料, 因為(wéi)甲醇能潤濕吸附劑表麵(miàn), 並滲(shèn)透到(dào)非極(jí)性的(dí)矽膠(jiāo)鍵(jiàn)合相中, 使(shǐ)矽膠更(gēng)容(róng)易(yì)被(bèi)水(shuǐ)潤濕；然(rán)後(hòu)再加入(rù)水或緩(huǎn)衝液衝洗(xǐ)，創(chuàng)造和(hé)樣(yàng)品(pǐn)溶劑(jì)相容的環境並提(tí)高(gāo)回(huí)收(shōu)率(shuài)。
三(sān)，上樣
一般可采取(qǔ)以下(xià)四種方法(fǎ)：
(1) 用0.1mol/L 酸或(huò)鹼調節, 使(shǐ)pH<3或(huò)pH>9, 離心取(qǔ)上(shàng)層液萃(cuì)取；
(2) 用甲(jiǎ)醇，乙腈等沉澱(diàn)蛋白質(zhì)後取上清液, 以水或(huò)緩衝液(yè)稀釋後(hòu)萃取；
(3) 用酸(suān)或無機(jī)鹽沉(chén)澱(diàn)蛋白(bái)質後取上清(qīng)液(yè), 調(tiáo)節(jié)pH 值後萃取；
(4) 超聲15min後加入水，緩(huǎn)衝液, 取上清液萃取(qǔ)。流速(sù)應控製為1ml/min, 流(liú)速快(kuài)不利於待測物與固定(dìng)相結(jié)合。
四，淋洗
反相(xiāng)SPE的清洗溶劑(jì)多(duō)為(wéi)水(shuǐ)或緩衝液, 可在清(qīng)洗液(yè)中(zhōng)加入少量(liáng)有(yǒu)機溶劑，無機鹽或調節pH值。加(jiā)入小柱的(dí)清洗液應不超過(guò)一個小(xiǎo)柱(zhù)的容(róng)積, 而(ér)SPE濾(lǜ)膜為(wéi)5～10ml。
五，洗脫
應(yīng)選(xuǎn)用(yòng)5～10ml離(lí)子強度較弱(ruò)但能洗(xǐ)下待測物(wù)的洗(xǐ)脫溶劑。若(ruò)需較(jiào)高(gāo)靈敏度(dù), 則可先將(jiāng)洗脫(tuō)液揮幹後, 再用流(liú)動相重組(zǔ)殘留物後進樣。體(tǐ)內(nèi)樣品洗(xǐ)脫後多(duō)含(hán)有(yǒu)水(shuǐ), 可(kě)選(xuǎn)用冷(lěng)凍(dòng)幹(gān)燥法(fǎ)。保留能力(lì)較(jiào)弱(ruò)的(dí)SPE 填料可用(yòng)小體積(jī)，較弱的洗脫(tuō)液洗下(xià)待(dài)測物(wù),再(zài)用(yòng)極(jí)性(xìng)較(jiào)強的HPLC 分析(xī)柱(zhù)如C18柱分析(xī)洗脫(tuō)物。若待測物可電離, 可調(tiáo)節(jié)pH 值(zhí), 抑製(zhì)樣(yàng)品離子化(huà), 以(yǐ)增(zēng)強待測(cè)物在(zài)反(fǎn)相(xiāng)SPE 填料(liào)中的保留, 洗脫(tuō)時調節pH值(zhí)使其(qí)離子化(huà)並(bìng)用較(jiào)弱的溶劑(jì)洗(xǐ)脫, 收(shōu)集洗脫(tuō)液後(hòu)再(zài)調節pH值使其在(zài)HPLC分析中達(dá)到*分(fēn)離效(xiào)果(guǒ)。在洗脫過(guò)程(chéng)中(zhōng)應(yīng)減(jiǎn)慢流速,用兩(liǎng)次小體積(jī)洗脫代替一(yī)次大(dà)體積(jī)洗脫, 回(huí)收(shōu)率更高。
